產品介紹
本品為綠色熒光標記的溶酶體探針,具有504/511nm的最大激發/發射波長。本品以溶于無水DMSO的1mM儲存液形式提供。
使用方法(僅供參考)
使用前,先將本品取出回溫至室溫,并對其進行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作濃度需根據不同的實驗要求、細胞類型、細胞或組織的膜通透性等進行優化。
1.工作液的配制
利用培養基或合適的緩沖液將1mM 儲存液稀釋至工作濃度,推薦工作液濃度為50-75nM;
【注意】:1)為了降低探針加載過度可能引起的假陽性,建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。2)若細胞在染色后于不含染料的培養基中孵育,會觀察到熒光信號的衰減和細胞的空泡化現象。
2.染色
2 .1 對于貼壁細胞1)將細胞置于培養皿中的蓋玻片上,加入合適培養基,使其爬片生長。
2)待細胞生長到合適豐度,吸除培養液,加入適量37℃預熱的含探針工作液。于生長狀態下孵育30min~2h(具體孵育時間需根據細胞類型而定)。
【注意】:對Lysotracker Green DND-26內化過程的動力學研究表明,活細胞攝取此染料僅需數秒即可。缺點在于此探針可能引起溶酶體產生“堿性效應Alkalizing effect”,也就是說過長孵育時間會誘導溶酶體pH值提高。建議僅當該探針于37℃孵育細胞1-5min才可用作pH指示劑。
3)利用新鮮培養基替換上述染色液并在熒光顯微鏡(含合適濾片)下觀察。若染色不夠充分,建議增加染料濃度或延長染色時間。
2.2 對于懸浮細胞
1)離心,吸除上清。
2)利用37℃預熱的探針工作液重懸細胞,于生長狀態下孵育30min~2h(具體時間需根據細胞類型而定)。
3)離心,吸除染色液,加入新鮮培養液重懸細胞。
4)置于熒光鏡下觀察。若染色不夠充分,建議增加染料濃度或加長染色時間。
【注意】:對于懸浮細胞,也可將細胞貼附于經BD Cell-Tak處理過的蓋玻片上,然后使用類似于貼壁細胞的方法進行染色。