細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶紫染色，再經(jīng)碘液媒染（以增加染料與細(xì)胞的親和力）后，用酒精或丙酮脫色，再用復(fù)染色劑染色。不被脫色而保持原顏色者為革蘭紙陽(yáng)性菌（G+）；被脫色后又被染上復(fù)染劑的顏色者為革蘭氏陽(yáng)性菌（G-）。此法可將細(xì)菌分為兩大類(lèi)。
    革蘭氏染色的機(jī)理主要是利用兩類(lèi)細(xì)菌的細(xì)胞壁成分和結(jié)構(gòu)不同。革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁中含有較多的類(lèi)脂質(zhì)，而肽聚糖的含量較少。當(dāng)用乙醇或丙酮脫色時(shí)，類(lèi)脂質(zhì)被溶解，增加了細(xì)胞壁的通透性，使初染后的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)胞被脫色，經(jīng)復(fù)染后，又染上復(fù)染液的顏色；而革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁中肽聚糖的含量多且交聯(lián)度大，類(lèi)脂質(zhì)含量少，經(jīng)乙醇或丙酮洗脫后，肽聚糖層的孔徑變小，通透性降低，因此，細(xì)胞仍保留初染時(shí)的顏色。
【實(shí)驗(yàn)材料、藥品及器具】
   1、菌種：大腸桿菌（Escherichia coli），枯草芽孢桿菌（Bacillus Subtilis），金黃色葡萄球菌（Staphylococeus auresu）
   2、染液：草酸銨結(jié)晶紫液，革蘭氏碘液，95%的酒精，藏花紅液
   3、器皿洗凈的載玻片6片、顯微鏡、酒精燈、接種環(huán)、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、鑷子、玻璃缸、瓶裝蒸餾水
【實(shí)驗(yàn)步驟】
   1、取培養(yǎng)12-24h的大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌分別涂片、固定。
   2、加草酸銨結(jié)晶紫染色劑一滴，染色1分鐘。
   3、傾去染液并用洗瓶裝水輕輕沖洗。
   4、加碘液染1分鐘，水洗，然后用吸水紙吸干。
5、將載玻片略?xún)A斜，滴加95%酒精脫色（洗至流下的酒精中無(wú)紫色時(shí)為止），然后水洗。
6、加藏花紅復(fù)染，染色30分鐘，水洗，用吸水紙吸干或烘干。
7、用油鏡鏡檢觀察。